精液採集後應立刻放於維持 35℃ 之水浴中,並儘快進行精液檢查,精液量由集精瓶中量得,一般以毫升為單位。精液的外觀、色澤 、濃度等,應於最短時間內檢查完成。
利用顯微鏡檢查精子活力及泳動速率,步驟如下:
(一)紅血球計數法:
應用紅血球計數盤來計算,計算最少 4∼5 大格(64∼84 個小方格) 內之精子數,其步驟如下:
(二)光電比色法:
此法為計算精子數迅速而實用之方法。其原理是以光透過標準稀釋精液多少為依據。此比色計必須標準化,該標準化是先由血球計計算法決定已知精子濃度後,予以換算應用。
(三)視覺判定:
由不透明度快速判定精子濃度,其方法是製作不同濃度之不透明標準液。氯化鋇及硫化鈉可調製硫化鋇溶液。分為 5 個不同濃度,0.06、0.09 、0.12、0.15、0.18 % 即可應用。精液 1:枸鹽酸鈉稀釋液 10,稀釋後,與不同濃度標準液比較後,可快速了解精子濃度。
(四)紅血球數自動測定儀
此法目前為最快速,準確性最高之方法,在製造冷凍精液之場所,相當實用,唯儀器價錢較貴。
由精子的外觀來判定好壞,其方法如下:
99 ml 蒸餾水
1 ml 40 % 之福馬林
此法乃利用死、活精子吸收染色劑之差異性為依據。此試驗中,玻片上死亡之精子會吸收染色劑而呈藍色,活精子不吸收染色劑而無色。染色劑之配製法如下:
A.染色劑 ─ 2 % 水溶性 eosin 溶於 M/8 之磷酸緩沖液中 (pH7.3)
磷酸緩沖劑:80.4 ml M/8 之 Na2HPO4
19.6 ml M/8 之 KH2PO4
B.染色劑 ─ 1 份 Opal blur 加 1 份 M/8 的磷酸緩沖液
A、B 染色劑等量混合,加熱過濾後備用。
染色之方法:
活精子在冷震盪前以不同染色劑染色,可測定活精子所佔的%。其方法如下:少量稀釋過的精液樣品浸入 0℃ 水浴中 10 分鐘。俟冷休克後計算活精子的 %。使用原精液時,很多精子會死,所以可依需要將原精液稀釋,取 1 ml 做試驗即可。稀釋液拌演緩沖 劑及精子抵抗冷休克之保護劑。冷休克後活精子的 %,在適當貯存條件下,可望維持活力 2~5 天。
精子的解糖作用乃其細胞酵素及其他還原物質所致,將葡萄糖還原成酸(乳酸或其他)。許多研究者認為精子解糖作用為精子活力之能量來源,與其存活率無關。影響精子解糖速率之因子如溫度、精蟲活力、糖濃度、氫離子 濃度、酸度等。測定精子解糖速率是一定時間間隔前後,測葡萄糖含量與乳酸含量之化學分析。培養液中葡萄糖含量減少,酸度上升之變化,與精蟲活力成正比。
吸速率是吸收氧,排出二氧化碳,此與糖解作用有密切關係。影響精子呼吸速率之因素如稀釋液、稀釋速率、氫離子濃度、溫度、氣體、化學物質、精子新鮮度等。呼吸速率之測定可利用 Barcroft-warburge 呼吸率測定器或相似之方法來測定,測定時應控制精子濃度,及測定前後活精子所佔之%。而氧在限定範圍內變異大,所以培養基中吸氧量之測定是必須的。
美藍溶液之配製: 50 公克美藍溶於 100 ml 3.6 % 之枸椽酸 鈉緩沖液中(Na3 C6H5O7 2H2O)。
試驗方法: 0.2 ml 精液與 0.8 ml 蛋黃-枸椽酸稀釋液混合使稀釋完全,加0.1 ml 的美藍溶液,混 合完全,上覆 0.5 英吋礦物油密封試管,將試管放入 43.3℃∼46.1℃ 熱水浴中,觀查美藍褪色所需時間。品質好之精蟲藍色褪去時間約 3∼6 分鐘,若美藍褪色時間超過 9分鐘 ,不適於受精使用,此種精液不是精蟲數目太少,即是精子活力太差。部份還原物質(酵素或細菌等)亦會使藍色褪去,而非精子所引起之褪色,故目前對還原時間未設定明確之標準。
(一)染色液之製備
1.染色液配方一: Sodium glutamate. H2O 麩酸鈉 1.92g Fructose or glucose 果糖或葡萄糖 0.6g Sodium acetate (anhydrous) 無水醋酸鈉 0.51g Magnesium acetate. 4H2O 醋酸鎂 0.08g Potassium citrate. H2O 檸檬酸鉀 0.128g 溶於水中並泡成 100 ml (以蒸餾水) 每10ml溶液內加入0.16g eosin(水溶性)及0.6g nigrosin(水溶性) 2.染色液配方二: Sodium citrate (Na3 C6 H5O7 2H2O) 檸檬酸鈉 3.6 g 溶於蒸餾水中並泡成 100 ml 每 10 ml 溶液內加入 0.16 g eosin 及 0.6 g nigrosin
(二)鏡檢器材:
(三)鏡檢步驟:
土雞精子型態(1000×) |
菜鴨精子型態(1000×) |
菜鴨精子(1600×)箭頭 所指為死亡精子 |
鵝精子(1000×) |
雞精子 |
火雞精子(1000×) |
兔子之精子(400×) |
兔子之精子(400×) |
兔子之精子(400×) |
火雞之精子(400×) |
火雞之精子(400×) |
火雞之精子(400×) |
豬精子(1000×) |
箭頭所示為頭帽型態不良之豬精子(400X) |
箭頭所示為含有原生質滴之不良之豬精子(400X) |