生殖細胞的冷凍　　　　　　　　　25　　　　　　第二章 精子銀行

肆、兔精子的冷凍 　　國立屏東技術學院畜產技術系謝來安博士利用甘油和蛋黃為冷凍劑，來冷凍保存兔精子。兔冷凍精液經解凍後，進行六頭母兔的子宮頸授精，授精量為2毫升，內有總精子數2千萬隻。有五頭母兔分別產下12、2、7、8和9頭仔兔(謝，1996)。 精液冷凍 　　公兔精液之採集，以假陰道讓公兔射精於採集瓶內(黃等，1992)。所得精液之精子活力，係以具有前進運動精子數之百分比為評比，其數值不宜低於80％。兔精液轉置入15毫升的離心管中，擺放在18℃的恆溫保存箱或水浴槽，使之溫度下降到18℃。 　　BF5釋液是以100毫升的蒸餾水，溶入0.2公克Tris (hydromethyl) aminomethane、1.2公克TES-N-Tris (hydromethyl) methy-2-aminomethane sulfonic acid 和3.2公克葡萄糖，再跟蛋黃混合成有20﹪蛋黃的稀釋液。BF5(+8﹪甘油)稀釋液是取8毫升甘油和BF5液混合而成。 　　稀釋液也降溫到18℃時，再把精液與BF5稀釋液等量混合，混合後的稀釋精液仍放在離心管，並放入有水的燒杯裡，一起擺在4℃冰箱，讓其降溫到4℃。當稀釋精液降溫到4℃後，再把含有8﹪甘油的稀釋液BF5(+4﹪甘油)等量混合。等五分鐘後，就把這些精液裝填到0.5毫升的冷凍麥管內，封口後先置放在液態氮液面上方三公分處，停留三分鐘，再讓麥管滾入液態氮，完成冷凍步驟。 精液解凍 　　冷凍麥管要解凍時，直接由液態氮中取出，浸入45℃的水浴槽，經20秒後，取出並拭乾麥管外的水滴。把封口端剪去，讓解凍精液流入微量管中，此時宜保存在25℃，並儘快進行精子活力檢查。 　　解凍精子活力檢查，係先抹約0.2毫克的咖啡因粉末於玻片上，再置一滴解凍後之精液，鏡檢其活力，且其活力要多於40﹪，始能維持母兔之懷孕率正常。 參考文獻 謝來安。1996。稀釋液、甘油濃度及清潔劑對兔精子冷凍保存之影響。中畜會誌25(2): 175-181。