乳品微生物 快速檢測
畜試所新竹分所 李國華
乳房炎的原因雖然包括細菌、黴菌、黴漿菌和病毒等微生物的感染及種種理化刺激，但大部分的乳房炎起因於細菌的感染，包括葡萄球菌、鏈球菌、棒狀桿菌、大腸菌、芽胞梭菌和單胞菌等之直接感染乳房及布氏桿菌、分枝桿菌等全身性疾病之乳房病變。由乳房炎乳汁分離到之微生物如表1，而主要感染菌種與病型之發生頻度如表2。這些微生物廣泛存在於周圍環境(糞、尿和牛床等)或正常之體表和天然孔道內，或出現於感染之乳腺和乳汁中，主要經由榨乳用抹布、乳杯、榨乳者之手指或昆蟲等媒介，由乳頭口侵入乳房內，造成乳房炎。
乳房炎造成的經濟損失很大，更會直接影響乳品質，所以世界各地之酪農不得不去重視、防治它。乳房炎的診斷首先目診乳房和乳頭的大小、形狀、色彩、對稱性和有無外傷，然後採取各種檢驗所需的乳汁材料，並觸診乳房和乳頭有無熱感…冷感、腫脹、硬結、委縮或疼痛及乳管系統有無暢通等。乳汁檢查包括理化和病原學檢查，理化檢查法極多，摘要如表3，目前最常用的方法是：(一)加州乳房炎試驗法規CMT法)規(二)體細胞數自動化測定法(三)電導度法。
至於病原學檢查，傳統的方法是將生乳樣品接種到培養基﹙如血液瓊脂培養基，Blood agar ) 上培養，經一段時間後，可發現培養基上有多種不同的菌落，再挑選菌落作染色﹙如革蘭氏染劑 )、鏡檢或再去作增菌培養，進一步作生化試驗，再作判讀，整個培養及鑑定過程繁複且耗時，所以快速檢測法就成為時代潮流所趨勢，快速檢測大部分利用酵素、免疫抗體、迷你生化套組和核酸探針法，以達到快速且方便的目的。如應用於大腸桿菌群、沙門氏菌、腸炎弧菌、李斯特菌及金黃葡萄求菌都有快速檢測的套組產生，以腸炎弧菌快速檢測法為例，製成表格如表4，可得知，以快速檢驗法，可縮短處理時間，利用核酸探針雜交法及聚合酵素鏈鎖反應法（PCR），專一性相當良好，目前發展的方法可以鑑定出腸炎弧菌及產生熱穩定溶血素之腸炎弧菌株。另外在乳房炎最常見的病原菌：金黃色葡萄求菌、無乳鏈球菌、缺乳鏈球菌、乳房鏈球菌，都可以利用分子生物法，如PCR法，利用具特異性的引子增幅病原菌的 DNA ，經電泳過程，即可判定是哪一種病原菌。
最後再使用快速檢測法時，需要考慮以下幾個因子：1.準確度、彙整性及專一性2.操作簡單、省時和快速3.反應結果之難易度及客觀性4.每個樣品分析之成本5.官方之認可與學術之肯定6.操作人員之安全性7.環保概念
表1.
由乳房炎乳汁分離到之微生物
|
細 菌 |
Streptococcus S. agalactiae S. uberis S. dysgalactiae S. pyogenes S. zooeepidemicus S. bovis Staphylococcus |
S. aureus S. epidermidis Actinomyces bovis Mycobacterium bovis Brucella abortus Corynebacterium C. pyogenes C. bovis |
Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Enterobacter cloacae Pseudomonas P. aeruginosa P. fluorescens Glostridium perfringens Bacillus cereus |
| 黴 菌 |
Candida tropicalis |
Nocardia asteroides |
Trichosporon |
|
黴漿菌與病毒 |
Mycoplasma agalactiae subsp.bovis |
||
表2. 乳房炎之病型和感染菌種
|
感染菌種 |
乳房炎之病型 |
|||
|
一次性行(二次性) |
感 染 |
潛在性 |
急 性 |
慢 性 |
|
Staphylococcus |
＋ |
＋ |
廿 |
卅 |
|
(S. epidermidis) |
卅 |
卅 |
(＋) |
- |
|
Streptococcus , S.dysgalactiae |
＋ |
＋ |
廿 |
卅 |
|
(S.uberis , S.faecalis) |
＋ |
＋ |
＋ |
＋ |
|
Corynebacterium pyogenes |
＋ |
(＋) |
廿 |
卅 |
|
(C.bovis) |
卅 |
卅 |
- |
- |
|
Escherichia coli & klebsiella pneumoniae |
(＋) |
- |
- |
＋ |
|
Fungi |
＋ |
＋ |
＋ |
卅 |
發生頻度：卅高，廿稍高，＋低，(＋)極低，-無發生。
表3. 乳汁理化學檢查摘要
|
項 目 |
意 義 | 測定方法 | |
|
理 學 檢 查 |
炎症使乳中纖維素增多而致凝固物形成 |
檢乳杯法、黑布法 | |
|
化 學 檢 查 |
細胞數 |
炎症使乳中體細胞數增加，其增加可由直接計數和間接定性或定量檢查出 |
直接鏡檢法(Breed 氏法)、電子螢光計數法. CMT |
|
𨥨 |
乳房炎乳汁中體細胞數增多，其所產生之𨥨如觸𨥨(Catalase)、NAG𨥨亦增多 |
觸𨥨(氧產生法)，NAG𨥨(比色法) |
|
|
pH |
炎症時血中重碳酸離子選擇性漏入乳中為主，加上納、氯、鎂、鈣等的增加，使pH大多會上升 |
pH計，pH試紙 |
|
|
電解質 |
炎症時乳中鈉、氯增加而鉀減少 |
電導度法 |
|
表4 腸炎弧菌快速檢測方法
|
檢測方法 |
耗費時間 |
耗費金額(元/1次) |
分型能力 |
優缺點 |
|
傳統方法 |
5-10天 |
1,000-3,000 |
- |
時間長、操作複雜 |
|
核酸探針檢驗法 |
60小時 |
1,000-3,000 |
85-88% |
可能有誤判情況 |
|
PCR |
48小時 |
2,000-5,000 |
76-85% |
可能有抑制或干擾現象 |
|
ELISA |
30小時 |
1,000-4,000 |
90-93% |
可用於定量 |
|
PFGE |
4天 |
2,000-5,000 |
98-100% |
簡便 |
|
RAPD |
1天 |
2,000-5,000 |
86-92% |
困難度及時間皆低 |
|
Ribotyping |
6天 |
3,000-5,000 |
98-100% |
較高時間及經費 |
(Marshall et al.,1999)