如何檢測多產基因

一、血液細胞的萃取

自豬隻頸靜脈採血3-5ml，以DNA套組(Puregene, Gentra System)萃取白血球細胞之核內DNA。

　

二、聚合�玟s鎖反應(PCR)

(一)PCR製備條件

10X Buffer 1.0μl ；dNTP (2.5mM) 1.0μl；Forward primer 1.0 μl；reverse primer 1.0μl；Taq DNA polymerase (5U) 0.2μl；dH2O 3.8μl；DNA sample 2μl；總反應體積為10μl。

ESR forward primer (ESRF)核甞酸序列

5’-CCTGTTTTTACAGTGACTTTTACAGAG-3’

ESR reverse primer (ESRR)核甞酸序列

5’-CACTTCGAGGGTCAGTCCAATTAG-3’

　

(二)PCR反應條件

變性：94℃..5分鐘。

增幅：94℃..30秒、60℃..30秒 、72℃..30秒。 40個循環。

延長：72℃..10分鐘。 4℃hold。

　

(三)限制�炊螺峇狨�

將PCR產物取出加入buffer M和PvuⅡ(15U)各2μl，滅菌水6μl ，總反應體積為20μl ， 於37℃作用6小時。

　

(四)膠體電泳呈相

配置4﹪Agarose和0.5﹪Tris-borate EDTA膠片備用，電泳伏特 110V， 泳動一小時，以染劑溴化乙錠 (ethidium bromide) 過染30分鐘，以UV燈照射顯相拍照。
[pig/dopgipall.htm]