材料與方法

I.種兔群

本試驗共檢測607頭種兔之GPIPGD遺傳型,其中包括紐西蘭白兔172頭、以及不同毛色的雷克斯兔種:白色雷克斯兔56頭、海狸色雷克斯兔65頭、錦企拉色雷克斯兔266頭和寶藍色雷克斯兔48頭。紐西蘭白兔血樣取自台灣省畜產試驗所畜牧場種兔群。雷克斯兔血樣來自台灣省畜產試驗所畜牧場和雲林縣兔生產合作社二個社員場的種兔群。

 

Ⅱ.採血與紅血球分離

血樣取得方式有兩種,其一是以抗凝血劑潤濕過的塑膠針筒,自兔之耳靜脈抽取12 ml血液,經2,000 rpm離心10分鐘,使所需之紅血球沉澱,倒掉血漿,再加入0.85%生理鹽水反覆清洗、離心兩次後,將沉澱下來在底部之濃稠的紅血球做為血型鑑別備用,若當天不能進行血型鑑別,則需凍存於 -20℃冷凍櫃。另一種採血方式是以注射針刺破耳尖上的耳靜脈,使用濾紙片在傷口的血滴上吸取血滴,讓濾紙片吸附血滴有1.5公分左右,即把該血片裝入有蓋的微量塑膠管,置於冰筒內保存攜回實驗室(3)。濾紙片的長度是5公分、寬是0.5公分。隨後或隔夜再把濾紙片剪下一段0.5×0.5公分的血片塊,以1015 ul的蒸餾水來溶出血球膜上的GPIPGD(4)。田間採樣或仔兔採樣時,以血片方式採樣較容易。因此在雲林縣兔生產合作社二個社員場種兔群採血時,就採用血片法。

 

Ⅲ.GPIPGD電泳與遺傳型判讀

兔的GPIPGD之電泳與判讀方法,雷同於張等(1994)鑑別種豬或吳等(1996)鑑別馬匹的方法。本試驗以醋酸纖維膜電泳片(CA plate)來電泳呈相,所需血樣量僅約2 ul即可,故取離心後的濃稠紅血球液12 ul10 ul的蒸餾水混合後的溶出液,或經血片採樣後的溶出液,放入臨床電泳套組(Model G4063000, Helena Co.)的八個洞樣品槽微孔裡,隨即以血樣施點頭把八個溶解血樣轉印到電泳片上。GPI25分鐘電泳和PGD20分鐘電泳後,就依電泳呈相來判讀遺傳型。依據豬GPIPGD的電泳帶狀型態,單帶者是遺傳型純合子個體,而呈現參個電泳帶者是遺傳型雜合子個體。GPI泳動方向是由陽極泳向陰極,經染色後的GPI會呈現三個泳帶,染色的深淺有差別,離起始點近的第一泳帶呈色較深的,而其餘兩個泳帶呈色較淺,是為單帶型者,判讀為GPI-AA型,而離起始點稍遠的第三泳帶呈色較深之單帶型者,判讀為GPI-BB型;GPI-AB遺傳型雜合子個體的GPI電泳帶中間帶呈色度較上下兩帶為濃(5)PGD泳動方向則由陰極泳向陽極,因此離起始點遠者為PGD-AA型,而離起始點近者為PGD-BB型,以及呈現參帶電泳相的PGD-AB型。

 

Ⅳ.紐西蘭白兔的PGD對偶基因傳遞率

紐西蘭白兔的種兔群有PGD遺傳型AAABBB型,因此追蹤其仔兔群的遺傳型。計有627頭八週齡仔兔被檢測且有雌雄親的遺傳型記錄。

 

Ⅴ.統計分析

遺傳型頻率依實得個體數之電泳相類別計算頻率,諸如PGD遺傳型頻率是以具有PGD-AAPGD-ABPGD-BB三種遺傳型個體數各佔總檢測個體數百分比表示之。種兔的性別和遺傳型之關聯顯著性,則以卡方檢測法進行之。