人工生殖技術：兔胚移置

EMBRYO TRANSFER OF RABBITS

兔胚移置：

　　排卵同期化之母兔兩頭，一為供胚母兔先經超量排卵並配種處理，一為把收集到兔胚移入受胚兔，達到產仔兔的目的。受胚兔則予誘發假懷孕 (pseudopregnancy)。

胚移置器材：

1. 手術器械：包括解剖剪（刀）、止血鉗、覆布鋏、引導針、 鑷子、縫針、縫線及滅菌手術手套。
2. 藥品：麻醉藥 ( Zylazline & Ketamine 或 Pentobarbital & ether) 碘酒、酒精棉花、消毒水與抗生素。
3. 洗胚器材：沖洗液或培養液（PBS 或 F-10 medium 含 1 ％ 兔血清）、silicone ubing、Pasteur pipette 、syringe、filter、接收導管、試管（架）、 petri dish。
4. 檢胚用具：立體顯微鏡與倒立顯微鏡。
5. 移置器具：注入器及 silicone tubing。

胚移置步驟：

一、胚之收集與移置前之準備：

在配種後 1∼6 日間，供胚母兔經外科腹腔手術或予以犧牲放血後，暴露其生殖系統（含卵巢、輸卵管、子宮），檢視卵巢排卵情形。 自子宮頸穿入接收導管，並固定之。 以 silicone tubing 自輸卵管部小心穿入，並以手指固定 tubing 前端與輸卵管部。 將沖洗液自 syringe 中緩慢注入（約 5~7 ml，並觀察輸卵管是否鼓起），而自接收導管回收流出之沖洗液。 以手指輕輕擠壓留在生殖道中之沖洗液，使回收完全。 重覆相同的動作，沖洗另一邊之輸卵管或子宮。 將回收之含胚試管經靜置 3~5 分鐘後，以 Pasteur pipette 自試管吸出底層之沖洗液至培養皿 (petri dish) 中。 微微搖動 petri dish 使胚集中於培養皿之中央後，以立體或倒立顯微鏡檢視胚之數目及品質。 將胚以培養液清洗三次後，裝入移置用之注入管中。

胚之收集

二、受胚母兔之準備與移置：

1. 受胚母兔 (recipient) 經假懷孕處理（以輸精管結紮 之公兔配種或靜脈注射 HCG ）後依體重注射 zylazine (5mg/kgBW) 與 Ketamine (30mg/kgBW) 予以全身麻醉，再固定於手術台上，並將腹部手術部位之兔毛剃除。
2. 手術部位，先塗擦酒精和碘酒消毒之，再覆以手術覆布 ，並以覆布鋏固定之。
3. 於倒數第 1~2 對乳頭部位之腹中切開 3~5 cm 之開口。
4. 輕輕以手指勾出單邊之部份子宮，並檢視卵巢排卵狀況， 經確定排卵後，即以手指小心固定輸卵管部。
5. 將含胚及培養液之注入管( silicone tubing )前端，自輸卵管部導入約 2~3cm，並手指輕壓固定之。
6. 以 syringe 徐徐將胚及培養液注入管推送入輸管中。
7. 完成移置後，以含100IU/ml Heparin 之生理食鹽水清洗內臟之血跡；縫合腹壁及皮膚層後，於傷口塗擦碘酒，並在皮下注射 1ml combion，隔日再予注射一次。
8. 安置受胚母兔於清潔舒適之環境，令其緩慢甦醒。

胚移置注意事項：

應選擇健康良好且可生育之母兔進行移置。 母兔被處理前應先經三週以上之隔離飼養，避免造成假懷孕。 以新母兔（未曾生育）做為受胚兔時，應於使用前三週誘發其假懷孕，可提高移置後之成功率。 若重覆應用 HCG 誘發同一母兔排卵時，應限制在 3~4 次為宜，以免因體內抗體之增加而降低效果。 母兔接受外科手術前，應先絕食數小時，甚至隔夜禁食以利手術之進行。 置入早期胚 (1~16 cell stage) 宜自部注入，若為 morulae 或 bastocyst stage 則以後之胚，則以直接移入子宮腔內為宜，移入之部位為距宮管交接部 (uterotubal junction) 1~1.5cm 之子宮處。 胚置入時拌隨之 medium 含量愈少愈好，約 0.03∼0.08ml 為佳。 移置過程應儘可能減少微生物之污染。