專題報導

生乳生菌數檢驗法之介紹

光泉公司大園廠　徐倩儀

一、前言

　　自89年開始生乳計價改用生菌數及體細胞，所以生菌數之準確性對酪農有極大之影響。國內較大乳廠均備有快速微生物測定儀，此種快速微生物測定儀之優點為操作簡單、省時、快速，但為維持檢驗數據之準確性，儀器除定期保養外，尚需定期以傳統方法（中華民國國家標準CNS）比對，故建立傳統方法的檢驗是必要的。以下簡單介紹快速微生物測定儀之原理及傳統方法檢驗流程。

二、快速微生物測定儀之原理

　　快速微生物測定儀是以電阻（resistance）為檢驗訊號，再將電阻轉為阻抗（impedance），利用電極偵測微生物在培養液中代謝所造成的阻抗減少或電導（conductance）增加。當培養液中的微生物數量達到106~107CFU/ml時，培養液之電導會發生急劇變化；從最初開始培養至阻抗發生急劇變化所需的時間（小時）稱為偵測時間，偵測時間的長短與微生物初始數量對數值呈反比，也就是初始菌數越多越快增殖到106∼107CFU/ml，偵測時間越短，故可利用此特性先建立電化學檢測微生物之計數偵測曲線，然後以此偵測曲線中之偵測時間來間接推測樣品中微生物的數量。檢測生乳103∼105CFU/ml之生菌數所需偵測時間，只要8小時以內和3小時以上，即可檢驗出來。

三、傳統方法（中華民國國家標準CNS）檢驗

1. 工作環境
工作平台需寬敞、潔淨、光線良好，室內通風良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。微生物之密度要求為，當把傾倒於無菌培養皿中之培養基暴露於操作場所之大氣中15分鐘，每一平板所得之落菌數不超過15個。
2. 器具及材料

2.1

 乾熱滅菌器：玻璃用具之滅菌用，其內部中心溫度能達170℃以上，並維持該溫度1小時以上者。
2.2 高壓滅菌釜：培養基及稀釋液等不能乾熱滅菌之材料及用具之滅菌用，此滅菌溫度可達121℃以上，並維持該溫度15分鐘以上者。
2.3 冰箱。
 2.4 吸管：10ml及1ml，應分別有0.1ml及0.01ml之刻度。
2.5 無菌培養皿：內徑約9cm，深度約1.5－1.8cm。
2.6 錐形瓶：250ml及500ml。
2.7 培養箱：能維持內部溫度溫差在±1.0℃以內者。
2.8 攪拌器。
2.9 平板計數培養基（plate count agar），亦稱標準方法培養基（standard method agar）。
2.10 滅菌過0.85﹪生理食鹽水稀釋液：取8.5g氯化鈉（試藥級）溶於1000ml蒸餾水中，分裝於錐形瓶中，經121℃滅菌15分鐘，最後pH值為7.0±0.1。

3.

 檢液之調製
將生乳充分混合均勻後即為原液，取50ml置於450ml已滅菌之稀釋液中，做成10倍稀釋檢液。

4.

 檢液之處理使用已滅菌之吸管取10ml 10倍稀釋液至於90ml已滅菌之稀釋液中，做成100倍稀釋檢液，依序做成一系列之1,000倍、10,000倍等稀釋檢液。

5.

 生菌數之培養
5.1 原液及各稀釋倍數之稀釋檢液充分混合均勻後，分別用已滅菌之吸管吸取1ml注入無菌培養皿中，每一稀釋檢液至少做二重複，另取兩個無菌培養皿分別作培養基及稀釋液對照組用。作稀釋液之對照組時吸取1ml之稀釋液注入無菌培養皿中。
5.2 在5.1所述之每個培養皿中倒入12∼15ml已冷卻至45±1℃之培養基，迅速搖動使稀釋液與培養基混合均勻。
5.3 將5.2之培養皿靜置，待培養基凝固後倒置於35±1℃之培養箱中，培養48±2小時。

6.

 生菌數之計算
經培養後選取25∼250個菌落之兩個培養皿來計數，其生乳生菌數之表示方式為CFU/ml。

參考資料

中華民國國家標準。1991。食品微生物之檢驗法－生菌數之檢驗。總號：10890，類號：N6186。
經濟部中央標準局。