保存細胞：山羊胚 (Embryo of Goat)

母山羊　　　　胚

一、胚採集及冷凍保存所應用之器具

1.胚採集器具：

圖A.羊胚採集用器具 

a. Foley 氏導管，含充氣管(c)、氣球(e)及沖洗液進出管(d)。
b.不鏽鋼條，為支持 Foley 氏管，以便於通入子宮中。

圖B.母羊發情調節用器材與藥品 

a. CIDR 安置器 
b. 含助孕素之CIDR 
c. 海綿安置器 
d. 含助孕素之海綿 
e.PGF2α 

二、羊胚回收及裝填冷凍用具

圖C.羊胚回收及裝填器材 

1. 立體顯微鏡：羊胚檢出及品質鑑定。
2. 方格培養皿：盛裝沖洗液，便於胚之檢出。
3. 吸管：將胚自培養皿中吸出集中。
4. 防凍液：由左至右分別為 10％ 甘油 20％ Propandiol，25％ 甘油 25％Propandiol 及 1M Sucrose。
5. 裝填羊胚用之麥管（0.25ml）。

圖D.電腦控制冷凍降溫設備 

1. 電腦程式設定主機：設定不同降溫速率。
2. 降溫箱：內可置麥管，並有自動 Seeding 裝置。
3. 液態氮桶及氣壓表：供應降溫所需之液氮蒸氣。

• 羊胚之冷凍保存：
  • 溶液之配製：
    • 溶液 A：PBS ＋ 10％ FCS（54ml PBS ＋ 6ml FCS＝60ml）
    • 溶液 B：PBS ＋ 10％ glycerol（27ml 溶液A ＋ 3ml glycerol＝30ml）
    • 溶液 C：PBS ＋ 5％ glycerol（5ml 溶液A ＋ 5ml 溶液B＝10ml）
• 步驟：
  • 胚以 A 液洗三次（室溫下）。
  • 胚入 C 液 5 分鐘（室溫下）。
  • 胚入 B 液 10∼20 分鐘（室溫下）。
  • 以 0.25∼0.5ml 之麥管，吸 B 液至 5cm 長，吸空氣，吸含胚之 B 液 4cm 長，吸空氣，吸 B 液，最後封白粉。
  • 電腦控制降溫： 20℃∼0℃ 迅速冷卻 0℃∼-7℃ 1℃／min -7℃ seeding 5∼10 分鐘後再保持 10 分鐘 -7℃∼-35℃ 0.3℃∼0.6℃／min -35℃∼-196℃ 達-35℃後直接投入液態氮。
  • 將製成之冷凍胚（麥管）移至液氮筒內貯存。

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